茶树新梢cDNA文库的构建和ESTs测序成功率初步分析,以Trizol一步法

报道了国内第一个茶树cDNA文库的构建及其EST测序成功率分析。白茶美容以Trizol一步法从龙井43春茶新梢中提取总RNA，分离纯化富含Poly(A)的mRNA，LD-PCR反转录合成双链cDNA，以入TripEX2为载体，构建了龙井43新梢cDNA文库。以XL1-Blue为受体菌测定原始文库的滴度为6.8×l0^5 pfu／ml，总克隆数为3.5×l0^5个，重组率为98.05％，扩增后文库总滴度为7.2×l0^9pfu／ml。对随机挑取的噬菌斑进行PCR鉴定，表明插入片段大多分布在0.5.2.0kb之间，绝大部分在1．0．1．5kb左右。文库质量鉴定结果表明。构建的茶树新梢cDNA文库具有较好的库容量、较高的重组率以及较大的插入片段。对4320个克隆的序列测定表明，获得有用序列2963个，测序成功率为68．5％，剔除短序列后。首批共获得1687个茶树ESTs。

完成机构：[1]中国农业科学院茶叶研究所，浙江杭州3lO008 [2]中国农业科学院研究生院，北京lO008l [3]浙江大学分析测试中心生物大分子研究室，浙江杭州3l0029